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革兰氏染色法步骤(革兰氏染色法)
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1、革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。
2、未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察。
3、染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。
4、革兰氏染色属复染法,即将标本固定后,先用结晶紫染色1分钟后水洗,然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色,再用稀释石炭酸复红复染。
5、染色后除可以看到细菌形态外,还可将细菌分为两大类,即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G﹢)。
6、被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌(Gˉ)。
7、革兰氏染色原理尚不肯定,可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。
8、致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。
9、百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。
10、所以根据细菌的革兰氏染色性质,可以缩小鉴定范围,有利于进一步分离鉴定,以对疾病做出诊断。
11、又由于各种抗生素的抗菌谱不同,革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。
12、 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是: 1)涂片固定。
13、 2)草酸铵结晶紫染1分钟。
14、 3)自来水冲洗。
15、 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。
16、 5)水洗,用吸水纸吸去水分。
17、 6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。
18、 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。
19、干燥,镜检。
20、 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。
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