增殖灶是什么意思（增殖）

大家好，我是小夏，我来为大家解答以上问题。增殖灶是什么意思，增殖很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

一、MTT比色：

MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑盐）可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能，DMSO（二甲基亚砜）能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。在一定范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比，此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点，与细胞计数有良好的相关性。

二、rdU标记法

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。

2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。

3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。

4．甲醇/醋酸固定10min。

5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6．5％正常兔血清封闭。

7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。

8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。

9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

三、结晶紫法

1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。

2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。

3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。

4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。

5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。

6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。

7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。

8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。

四、酸性磷酸酶法

1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。

2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。

3．37℃，孵育1～4h。

4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。

5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。