凝胶电泳实验步骤（凝胶电泳）

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1、【分类】

2、（1）琼脂糖 ( Agarose ) 是一种线性多糖聚合物 , 系从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介 质 , 其密 度是由 琼脂 糖的浓 度决 定的。经过化学修饰的低熔点 (LMP) 的琼脂糖 , 在结构上比较脆弱 , 因此在较低的温度下便会熔化, 可用于DNA片段的制备电泳。

3、（2）聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式 : 一是用于分离和纯化双链 D N A 片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离 D N A 的缺点是 D N A 的迁移 率受碱 基组 成和序 列的 影响。由于无法得知未知 D N A 的迁移是 否反 常 , 故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶 电泳 确定双链 D N A 的大小。二是用于分离及纯化 单链 D N A 片 段的 变性聚 丙烯 酰胺凝 胶。这 类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关 , 故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。

4、【基本原理】

5、凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电 场当 中时 , 它们 就会 以一定 的速 度移向适当的电极 , 这种电泳分子在电场作用下的迁移速度 , 叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说 ,电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多 ,其迁移的速度也就越快 , 反之则较慢。由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质 , 如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺 胶等 , 从而降低了对流运动 , 故 电泳 的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩 擦系数 是分 子的大 小、极性及介质 粘度 的函数 , 因此根据分子大小的不同、 构成或形状的差异 , 以及所带的净电荷的多少 ,便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。在生理条件下 ,核酸分子的糖- 磷酸骨架中的磷酸基因 呈离子状态 ,从这种意义上讲 ,D NA 和 R N A 多核苷酸链可叫做多聚 阴离 子 ( P ol yani o n s )。因 此 , 当核 酸分 子 被放 置在 电场中时 , 它们就会向正电极的 方向迁 移。由 于糖- 磷酸 骨架 结构 上的重 复性 质 , 相同 数量 的双链 D N A 几乎具有等量的净电荷 , 因而 它们 能以 同样 的速 度向 正电 极 方向 迁移。 在一 定的电场强度下 , D N A 分子的这种迁移速度 , 亦即电泳的迁移率 , 取决于核酸分子本身的大 小和构型 , 分子量较小的 D N A 分子比分子量较大的 D NA 分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离 D N A 片段的基本原理。

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